MR-VP實驗——MR-VP 甲基紅試劑 vp試劑~1
操作步驟:
1.挑取實驗菌苔接種于生理鹽水管中,制備菌懸液,本實驗以大腸埃希氏菌、單增李斯特氏菌、產(chǎn)氣腸桿菌為例,進(jìn)行實驗;
2.然后用移液槍吸取100ul菌懸液,接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基中,每種菌接種2個試管;
3.之后放置于36℃培養(yǎng)24-48h。
MR實驗:
向試管中滴加3滴甲基紅試劑,觀察顏色變化,接種大腸桿菌和單增李斯特氏菌的試管變紅,為陽性反應(yīng);接種產(chǎn)氣腸桿菌的試管不變紅,為陰性反應(yīng)。
實驗原理:不同細(xì)菌分解葡萄糖的產(chǎn)物不同,大腸桿菌、單增李斯特氏菌可分解葡萄糖產(chǎn)生大量酸,使pH值下降到4.5以下,所以滴入甲基紅顯紅色; 產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)酸較少,所以滴入甲基紅顯橙黃色。
VP實驗:
另取試管,向試管中滴加V-P試劑A液(6%α-萘酚-乙醇溶液)9滴,B液(40%氫氧化鉀溶液)3滴,建議最低使用量為A液6滴、B液2滴。充分振蕩混勻,之后置于36?1℃培養(yǎng)0.5-4h。
培養(yǎng)結(jié)束后觀察結(jié)果,發(fā)現(xiàn)接種大腸桿菌的試管不變紅,為陰性反應(yīng);接種單增李斯特氏菌和產(chǎn)氣腸桿菌的試管變紅,為陽性反應(yīng)。
實驗原理:產(chǎn)氣腸桿菌、單增李特氏菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,并使丙酮酸脫羧,生成中性的乙酰甲基甲醇,在堿性溶液中被空氣氧化生成二乙酰,繼續(xù)與培養(yǎng)基中的胍基反應(yīng)生成紅色化合物,即為V-P陽性。