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檢驗原理:
通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網(wǎng)孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙,因此,能把結(jié)晶紫與碘復合物牢牢留在壁內(nèi),使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經(jīng)沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
操作步驟:
1. 涂片經(jīng)火焰固定,加(結(jié)晶紫溶液)溶液A染1分鐘,用清水沖去染液。
2.加(碘液)溶液B染1分鐘,水洗。
3.加(95%乙醇)溶液C,不時搖動玻片約10-30秒,至無紫色脫落為止,水洗。
4.加(沙黃復染液)溶液D,染1分鐘,水洗。
5.干后油鏡鏡檢。陽性菌呈紫色、陰性菌呈淡紅色。