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什么是蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗：
在GB4789.14標(biāo)準(zhǔn)中，在進(jìn)行蠟樣芽胞桿菌鑒定時蠟樣芽胞桿菌與蘇云金芽孢桿菌生化反應(yīng)相同，但蘇云金芽孢桿菌在形成芽孢的同時，會在芽孢旁形成一顆菱形、方形或不規(guī)則形的堿溶性蛋白質(zhì)晶體，稱為伴孢晶體，該晶體易被堿性染料著色，因此常用0.5%堿性復(fù)紅染料進(jìn)行染色觀察。而蠟樣芽胞桿菌和其他芽孢桿菌不產(chǎn)生伴孢晶體。這個染色實驗就是蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗。
操作步驟：
培養(yǎng)芽孢：將待測菌株接種至硫酸錳營養(yǎng)瓊脂平板，30?1℃培養(yǎng)24?2h，并于室溫放置3-4天。若芽孢產(chǎn)生不豐富，可在室溫繼續(xù)放置2-3天后觀察。
原理：芽孢桿菌在營養(yǎng)條件缺乏時，開始形成芽孢，因此在進(jìn)行細(xì)菌產(chǎn)芽孢相關(guān)試驗時，通常需進(jìn)行5-7天的放置或培養(yǎng)，待培養(yǎng)基內(nèi)營養(yǎng)耗盡，可獲得更豐富的芽孢。
制片染色：挑取培養(yǎng)物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥，微火固定后，加甲醇作用 30 s 后傾去，再通過火焰干燥，于載玻片上滴滿 0.5%堿性復(fù)紅，放火焰上加熱（微見蒸氣，勿使染液沸騰)持續(xù) 1 min～2 min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色 30 s，傾去染液用潔凈自來水徹底清洗、晾干后鏡檢。觀察有無游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形蛋白結(jié)晶體。
（注：在菌苔生長密集的地方營養(yǎng)消耗更快，更容易產(chǎn)生芽孢，因此挑取密集生長處的菌苔制片易觀察到更多芽孢）
