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操作步驟:
1.取細菌的新鮮培養(yǎng)物,用接種環(huán)接種于生理鹽水管中,振蕩混勻。
2.按照10倍系列稀釋法制備菌液,取接種量為10-100cfu的菌懸液,進行試驗。
3. 用移液槍吸取100μL稀釋好的菌液接種到MUG培養(yǎng)基管中,接種兩個平行管,同時吸取100μL生理鹽水接種到MUG培養(yǎng)基管中作為空白對照。
4. 相同的方法接種其他菌株,之后放置于30-35℃培養(yǎng)5-24小時
結(jié)果觀察:
發(fā)現(xiàn)接種大腸埃希氏菌和陰溝腸桿菌的試管變渾濁。而接種金黃色葡萄球菌的試管為澄清狀態(tài)。
葡萄糖醛酸苷酶檢測:
在黑暗環(huán)境中,使用366nm紫外燈照射培養(yǎng)后的試管,發(fā)現(xiàn)接種兩株大腸埃希氏菌的試管均產(chǎn)生藍白色熒光,這是因為MUG的β-糖醛酸苷鍵被大腸埃希氏菌產(chǎn)生的葡萄糖醛酸苷酶水解,釋放出4-甲基傘形酮,4-甲基傘形酮在紫外燈下可產(chǎn)生藍白色熒光。
而接種陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管無藍白色熒光,說明這兩株菌不能產(chǎn)生葡萄糖醛酸苷酶。
靛基質(zhì)試驗:
向培養(yǎng)后的試管滴加Kovacs靛基質(zhì)試劑2-3滴,立即觀察結(jié)果,也可以放置室溫5-10min觀察結(jié)果。發(fā)現(xiàn)接種兩株大腸埃希氏菌的試管均有紅色環(huán)產(chǎn)生,這是因為蛋白胨中的色氨酸被大腸埃希氏菌產(chǎn)生的色氨酸酶分解,形成靛基質(zhì)。靛基質(zhì)與Kovacs靛基質(zhì)試劑反應(yīng),形成紅紫色醌式化合物,即紅色環(huán)。
而陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌培養(yǎng)管有黃色環(huán),說明這兩株菌均不含有色氨酸酶。